Produkter

Serin/treonin-proteinfosfataser er blitt beskrevet i mange patogene bakterier som essensielle enzymer involvert i fosforyleringsavhengige signaltransduksjonsveier og ofte assosiert med virulensen til disse organismene.En inspeksjon av Mycoplasma synoviae-genomet avslørte tilstedeværelsen av et gen (prpC) som koder for en antatt proteinfosfatase fra proteinfosfatase 2C (PP2C) underfamilien.Her rapporterer vi en fullstendig biokjemisk karakterisering av M. synoviae fosfatase (PrpC) og den spesielle rollen til metallioner i struktur-funksjonsforholdet til dette enzymet.PrpC aminosyresekvensanalyse avslørte at alle restene involvert i det dinukleære metallsenteret og de antatte tredje metallionekoordinerende restene, konservert i PP2C fosfataser, er tilstede i PrpC.PrpC er et monomert protein i stand til å defosforylere fosfosubstrater med Mn(2+)-ioners avhengighet.Termisk stabilitetsanalyse demonstrerte enzymstabiliteten ved milde temperaturer og påvirkningen av Mn(2+)-ioner i denne egenskapen.Massespektrometrianalyse antydet at tre metallioner binder seg til PrpC, hvorav to med en tilsynelatende høyaffinitetskonstant.Mutasjonsanalyse av de antatte tredje metallkoordinerende restene, Asp122 og Arg164, viste at disse variantene viste en svakere binding av manganioner, og at begge mutasjonene påvirket PrpC-fosfataseaktivitet.I følge disse resultatene er PrpC et metallavhengig proteinfosfatasemedlem med en forbedret stabilitet i holo-formen og med Asp122, muligens implisert i det tredje metallbindingssetet, essensielt for katalytisk aktivitet.