Produkter

Oksidativ skade på DNA-baser resulterer vanligvis i dannelsen av oksiderte puriner, spesielt 7,8-dihydro-8-oksoguanin (8-oksoG) og 7,8-dihydro-8-oksoadenin (8-oksoA), hvor førstnevnte er en brønn- kjent mutagen lesjon.Siden 8-oxoG lett er utsatt for ytterligere oksidasjon sammenlignet med normale baser, ble innsettingen av en base under DNA-syntese motsatt en oksidert form av 8-oxoG undersøkt in vitro.En syntetisk mal som inneholdt en enkelt 8-oxoG-lesjon ble først behandlet med forskjellige ett-elektronoksidanter eller under singlett oksygenforhold og deretter utsatt for primerforlengelse katalysert av Klenow-fragment exo- (Kf exo-), kalvethymus DNA-polymerase alfa (pol alfa) ) eller human DNA-polymerase beta (pol beta).I samsvar med tidligere rapporter settes dAMP og dCMP inn selektivt overfor 8-oxoG med alle tre DNA-polymeraser.Interessant nok ble det funnet at oksidasjon av 8-oxoG induserte dAMP- og dGMP-innsetting på motsatt side av lesjonen av Kf exo- med forbigående hemming av primerforlengelse på stedet for den modifiserte basen.Videre utgjør lesjonen en blokkering under DNA-syntese av pol alfa og pol beta.Eksperimenter med et 8-oxoA-modifisert template-oligonukleotid viser at både 8-oxoA og en oksidert form av 8-oxoA direkte innsetting av dTMP av Kf exo-.Massespektrometrisk analyse av 8-oxoG-holdige oligonukleotider før og etter oksidasjon med IrCl62-er i samsvar med oksidasjon av primært 8-oxoG-stedet, noe som resulterer i dannelse av en guanidinohydantoin-del som hovedprodukt.Ingen bevis for dannelse av abasiske steder ble oppnådd.Disse resultatene viser at en oksidert form av 8-oxoG, muligens guanidinohydantoin, kan lede feillesing og feilinnsetting av dNTP-er under DNA-syntese.Hvis en slik prosess skjedde in vivo, ville den representere en punktmutagen lesjon som fører til G-->T- og G-->C-transversjoner.Imidlertid viser den tilsvarende oksiderte formen av 8-oxoA primært korrekt innsetting av T under DNA-syntese med Kf exo-.