Produkter

Membrantopologien til colicin E1-kanaldomenet ble studert ved fluorescensresonansenergioverføring (FRET).FRET involverte en genetisk kodet fluorescerende aminosyre (kumarin) som donor og en selektivt merket cysteinrest bundet med DABMI (4-(dimetylamino)fenylazofenyl-4'-maleimid) som FRET-akseptoren.Den fluorescerende kumarinresten ble inkorporert i proteinet via et ortogonalt tRNA/aminoacyl-tRNA-syntetasepar som tillot selektiv inkorporering i et hvilket som helst sted innenfor kolicinkanaldomenet.Hver variant inneholdt en stopp (TAG) mutasjon for kumarin inkorporering og en cystein (TGT) mutasjon for DABMI vedlegg.Seks interheliske avstander innenfor spiral 1-6 ble bestemt ved bruk av FRET-analyse for både de løselige og membranbundne tilstandene.FRET-dataene viste store endringer i de interheliske avstandene mellom helikser 3-6 etter membrantilknytning, og ga ny innsikt i den membranbundne strukturen til kanaldomenet.Generelt reduserte kumarin-DABMI FRET interheliske effektivitet ved membranbinding, og bygger på paraplymodellen for kolicinkanalen.En tentativ modell for den lukkede tilstanden til kanaldomenet ble utviklet basert på nåværende og tidligere publiserte FRET-data.Modellen foreslår sirkulært arrangement av helikser 1-7 i retning med klokken fra den ekstracellulære siden og membrangrenseflatetilknytningen til heliksene 1, 6, 7 og 10 rundt den sentrale transmembrane hårnålen dannet av heliksene 8 og 9.