Produkter

En av faktorene som forhindrer klinisk anvendelse av regenerativ medisin på degenerative brusksykdommer er en egnet cellekilde.Kondrocytter, den eneste celletypen brusk, dyrket in vitro under kulturbetingelser for å utvide celletall mister fenotypen sammen med evnen til å generere hyalint bruskvev.I denne studien fastslår vi at et serum- og vekstfaktorfritt tredimensjonalt (3D) kultursystem gjenoppretter evnen til de passerte kondrocyttene til å danne bruskvev in vitro, en prosess som involverer sox9. Bovine artikulære kondrocytter ble passert to ganger til tillate celleantallsutvidelse (P2) og dyrket ved høy tetthet på 3D-kollagen-type II-belagte membraner i medier med høyt glukoseinnhold supplert med insulin og deksametason (SF3D).Cellene ble karakterisert etter monolagsekspansjon og etter 3D-kultur ved flowcytometri, genuttrykk og histologi.De tidlige endringene i signaltransduksjonsveier under redifferensiering ble karakterisert. P2-cellene viste en progenitorlignende antigenprofil på 99 % CD44(+) og 40 % CD105(+) og en genekspresjonsprofil som tyder på intersoneceller.P2 i SF3D uttrykte kondrogene gener og akkumulert ekstracellulær matrise.Nedregulering av insulinreseptor (IR) med HNMPA-(AM3) eller PI-3/AKT-kinaseveien (aktivert ved insulinbehandling) med Wortmannin hemmet kollagensyntese.HNMPA-(AM3) reduserte ekspresjon av Col2-, Col11- og IR-gener samt Sox6 og -9.Ko-immunutfellings- og kromatin-immunutfellingsanalyser av HNMPA-(AM3)-behandlede celler viste binding av koaktivatorene Sox6 og Med12 med Sox9, men redusert Sox9-Col2a1-binding. Vi beskriver en ny kulturmetode som tillater økning i antall kondrocytter og fremmer hyalinlignende bruskvevsdannelse delvis ved insulinmediert Sox9-Col2a1-binding.Egnetheten til vevet som genereres via denne tilnærmingen for bruk i leddreparasjon må undersøkes in vivo.