Produkter

Kjernefysisk akkumulering av en mutant form av kjerneproteinet Lamin-A, kalt Progerin (PG) eller Lamin AΔ50, skjer ved Hutchinson-Gilford Progeria Syndrome (HGPS) eller Progeria, en akselerert aldringssykdom.Et av hovedsymptomene på denne genetiske lidelsen er tap av subkutant fett på grunn av en dramatisk lipodystrofi. Vi induserte stabilt ekspresjonen av humant PG og GFP -Green Fluorescent Protein- som kontroll i 3T3L1-celler ved å bruke et lentiviralt system for å studere effekt av PG-ekspresjon i differensieringskapasiteten til denne cellelinjen, en av de mest brukte adipogene modellene.Kvantitativ proteomikk (iTRAQ) ble gjort for å studere effekten av PG-akkumuleringen.Flere av de modulerte proteinene ble validert ved immunoblotting og sanntids PCR.Mitokondriell funksjon ble analysert ved måling av a) mitokondriell basalaktivitet, b) superoksidanionproduksjonen og c) den individuelle effektiviteten til de forskjellige komplekset i respirasjonskjeden. Vi fant at overekspresjon PG ved lentiviral genlevering fører til en reduksjon i spredningshastigheten og til defekter i adipogen kapasitet sammenlignet med kontrollen.Kvantitativ proteomikkanalyse viste 181 proteiner signifikant (p<0,05) modulert i PG-uttrykkende preadipocytter.Mitokondriell funksjon er svekket i PG-uttrykkende celler.Spesifikt har vi oppdaget en økning i aktiviteten til komplekset I og en overproduksjon av Superoxide-anion.Inkubasjon med reaktive oksygenarter (ROS) rensemidler driver til en reduksjon i autofagisk proteolyse som avslørt av LC3-II/LC3-I-forhold.PG-ekspresjon i 3T3L1-celler fremmer endringer i flere biologiske prosesser, inkludert strukturen til cytoskjelettet, lipidmetabolisme, kalsium regulering, translasjon, proteinfolding og energigenerering av mitokondriene.Dataene våre styrker bidraget fra ROS-akkumulering til den for tidlig aldrende fenotypen og etablerer en kobling mellom mitokondriell dysfunksjon og tap av proteostase i HGPS.