Produkter

Differensiering av orbitale fibroblaster til modne adipocytter og påfølgende akkumulering av fettvev har blitt vist i utviklingen av Graves' orbitopati (GO).Autofagi er involvert i adipogenese, men lite er kjent om rollen til autofagi i initiering og progresjon av GO.Målet med denne studien er å undersøke rollen til autofagi i patogenesen av GO. Orbitale fett-/bindevevseksplantater fra pasienter med GO og fra normale forsøkspersoner, samt isolerte orbitale fibroblaster, ble analysert.Adipogenese ble indusert ved bruk av differensierende medium med eller uten hydrogenperoksid, og autofagi ble manipulert ved bruk av bafilomycin A1 og Atg5-målrettet kort hårnål RNA (shRNA).Autofagosomer ble identifisert ved elektronmikroskopi.Uttrykk av autofagi-relaterte gener og adipogenese-relaterte transkripsjonsfaktorer ble analysert ved sanntids revers transkripsjon-polymerase-kjedereaksjon og/eller Western blot-analyse.Lipiddråpeakkumulering ble undersøkt ved Oil Red O-farging. Autofagiske vakuoler var mer rikelig i GO-celler enn i ikke-GO-celler (p<0,05).Uttrykk av autofagi-relaterte gener var signifikant høyere i henholdsvis GO-vev og celler enn i deres ikke-GO-motparter.Interleukin-1β økte LC3-II-, p62- og Atg7-protein i GO-celler.Autophagosomakkumulering ble vist på dag 4 av adipogenese og redusert på dag 10, sammen med dannelse av lipiddråper.Ekspresjon av LC3 og p62 proteiner økte innen 48 timer etter differensiering og avtok gradvis fra dag 4 til 10. Bafilomycin A1 behandling og Atg5 knockdown med shRNA hemmet lipiddråpeakkumulering og undertrykte ekspresjon av adipogene markører. Autofagi ble økt i GO vev og celler sammenlignet med ikke-GO-vev og celler, noe som antyder at autofagi spiller en rolle i GO-patogenesen.Autofagi-manipulasjon kan være et terapeutisk mål for GO.