Produkter

Forbedret nitrogenutnyttelse i storfe er viktig for å sikre en bærekraftig storfeproduksjon.Ettersom puriner og pyrimidiner (PP) utgjør en betydelig del av nitrogen i vom, er en forbedret forståelse av absorpsjon og intermediær metabolisme av PP avgjørende.Dette arbeidet beskriver utviklingen og valideringen av en sensitiv og spesifikk metode for samtidig bestemmelse av 20 puriner (adenin, guanin, guanosin, inosin, 2'-deoksyguanosin, 2'-deoksyinosin, xantin, hypoksantin), pyrimidiner (cytosin,,, uracil, cytidin, uridin, tymidin, 2'-deoksyuridin), og deres nedbrytningsprodukter (urinsyre, allantoin, β-alanin, β-ureidopropionsyre, β-aminoisosmørsyre) i blodplasma fra melkekyr.Den høyytelses væskekromatografibaserte teknikken koblet til elektrosprayionisering tandem massespektrometri (LC-MS/MS) ble kombinert med individuelle matrisetilpassede kalibreringsstandarder og stabile isotopmerkede referanseforbindelser.Den kvantitative analysen ble innledet av en ny forbehandlingsprosedyre bestående av etanolutfelling, filtrering, fordampning og rekonstituering.Parametre for separasjon og deteksjon under LC-MS/MS-analysen ble undersøkt.Det ble bekreftet at bruk av en log-kalibreringsmodell i stedet for en lineær kalibreringsmodell resulterte i lavere CV% og en mangel på tilpasningstest viste en tilfredsstillende lineær regresjon.Metoden dekker konsentrasjonsområder for hver metabolitt i henhold til det i faktiske prøver, f.eks. guanin: 0,10-5,0 μmol/L, og allantoin: 120-500 μmol/L.CV% for de valgte kvantifiseringsområdene var under 25%.Metoden har god repeterbarhet (CV%≤25%) og middels presisjon (CV%≤25%) og utmerkede gjenvinninger (91-107%).Alle metabolitter viste god langtidsstabilitet og god stabilitet i løpet av forsøk (CV%≤10%).Ulike grader av absolutte matriseeffekter ble observert i plasma, urin og melk.Bestemmelsen av relative matriseeffekter avslørte at metoden var egnet for nesten alle undersøkte PP-metabolitter i plasma hentet fra en arterie og de portale lever-, lever- og gastrospleniske vener og, med noen få unntak, også for andre arter som kylling, gris, mink, menneske og rotte.