Produkter

Proteinfosforylering regulerer ulike cellulære funksjoner og spiller en nøkkelrolle i tidlig utvikling av planter.For å komplementere og utvide tidligere undersøkelser av proteinfosforylering i Arabidopsis-frøplanter brukte vi en alternativ tilnærming som kombinerer proteinekstraksjon under ikke-denaturerende forhold med immobilisert metallion-affinitetskromatografi (IMAC) anrikning av intakte fosfoproteiner i Rubisco-utarmede ekstrakter, etterfulgt av identifikasjon ved bruk av todimensjonal gelelektroforese (2-DE) og væskekromatografi-tandem massespektrometri (LC-MS/MS).In-gel trypsinfordøyelse og analyse av utvalgte gelflekker identifiserte 144 fosforylerte peptider og rester, hvorav bare 18 fosfopeptider og 8 fosfositter ble funnet i PhosPhAt 4.0 og P3DB Arabidopsis thaliana fosforyleringssteddatabaser.Mer enn halvparten av de 82 identifiserte fosfoproteinene var involvert i karbohydratmetabolisme, fotosyntese/respirasjon eller oksidativ stressrespons-mekanisk sms.Anrikning av intakte fosfoproteiner før 2-DE og LC-MS/MS ser ut til å forbedre deteksjonen av fosforylerte treonin- og tyrosinrester sammenlignet med metoder som bruker anrikning på peptidnivå, noe som tyder på at de to tilnærmingene er noe komplementære når det gjelder dekning av fosforyleringssted.Sammenligning av resultater for unge frøplanter med de som ble oppnådd tidligere for modne Arabidopsis-blader identifiserte fem proteiner som er differensielt fosforylert i disse vevene, og demonstrerer potensialet til denne teknikken for å undersøke dynamikken til proteinfosforylering under planteutvikling.