Produkter

Beta-D-2'-deoksy-2'-fluor-2'-C-metylcytidin (PSI-6130) er en potent spesifikk hemmer av hepatitt C-virus (HCV) RNA-syntese i Huh-7 replikonceller.For å hemme HCV NS5B RNA-polymerasen, må PSI-6130 fosforyleres til 5'-trifosfatformen.Fosforyleringen av PSI-6130 og hemming av HCV NS5B ble undersøkt.Fosforyleringen av PSI-6130 med rekombinant human 2'-deoksycytidin kinase (dCK) og uridin-cytidin kinase 1 (UCK-1) ble målt ved å bruke en koblet spektrofotometrisk reaksjon.PSI-6130 ble vist å være et substrat for renset dCK, med en Km på 81 mikroM og en kcat på 0,007 s-1, men var ikke et substrat for UCK-1.PSI-6130 monofosfat (PSI-6130-MP) ble effektivt fosforylert til difosfatet og deretter til trifosfatet av henholdsvis rekombinant human UMP-CMP kinase og nukleosid difosfat kinase.Inhiberingen av villtype og muterte (S282T) HCV NS5B RNA-polymeraser ble studert.Steady-state inhiberingskonstanten (Ki) for PSI-61 30 trifosfat (PSI-6130-TP) med villtype-enzymet var 4,3 mikroM.Lignende resultater ble oppnådd med 2'-C-metyladenosintrifosfat (Ki=1,5 mikroM) og 2'-C-metylcytidintrifosfat (Ki=1,6 mikroM).NS5B med S282T-mutasjonen, som er kjent for å gi resistens mot 2'-C-metyladenosin, ble hemmet av PSI-6130-TP like effektivt som villtypen.Inkorporering av PSI-6130-MP i RNA katalysert av renset NS5B RNA-polymerase resulterte i kjedeterminering.