Produkter

Eukaryote celler inneholder en delikat balanse av små mengder av de fire deoksyribonukleosidtrifosfatene (dNTP), tilstrekkelig bare for noen få minutter med DNA-replikasjon.Både en mangel og et overskudd av en enkelt dNTP kan resultere i økte mutasjonshastigheter, feil DNA-reparasjon eller mitokondriell DNA-utarming.dNTP-er kvantifiseres vanligvis ved en enzymatisk analyse der inkorporering av radioaktivt dATP (eller radioaktivt dTTP i analysen for dATP) i spesifikke syntetiske oligonukleotider av en DNA-polymerase er proporsjonal med konsentrasjonen av det ukjente dNTP.Vi finner at den ofte brukte Klenow DNA-polymerasen kan erstatte det tilsvarende ribonukleotidet med det ukjente dNTP, noe som i noen tilfeller fører til en stor overestimering av dNTP.Vi beskriver nå analysebetingelser for hver dNTP som unngår ribonukleotidinkorporering.For dTTP- og dATP-analysene er det tilstrekkelig å minimere konsentrasjonene av Klenow-enzymet og av merket dATP (eller dTTP);for dCTP og dGTP måtte vi erstatte Klenow-enzymet med enten Taq DNA-polymerase eller Thermo Sequenase.Vi foreslår at i noen tidligere rapporter kan inkorporering av ribonukleotid ha forårsaket for høye verdier for dGTP og dCTP.