Produkter

I likhet med andre positiv-tråd RNA-virus, replikeres tombusvirus av det membranbundne virale replikasekomplekset (VRC).VRC består av den p92-viruskodede RNA-avhengige RNA-polymerase (RdRp), den virale p33 RNA-chaperonen og flere co-opterte vertsproteiner.For å bli en funksjonell RdRp etter translasjonen, bør p92-replikasjonsproteinet inkorporeres i VRC, etterfulgt av dets aktivering.Vi har tidligere vist i en cellefri gjærekstrakt-basert analyse at aktiveringen av Tomato bushy stunt virus (TBSV) RdRp krever en løselig vertsfaktor(er).I denne artikkelen identifiserer vi det cellulære varmesjokkproteinet 70 (Hsp70) som den co-opterte vertsfaktoren som kreves for aktivering av en N-terminalt trunkert rekombinant TBSV RdRp.I tillegg hemmer småmolekylbasert blokkering av Hsp70-funksjon RNA-syntese av tombusviruset RdRp in vitro.Videre viser vi at nøytrale fosfolipider, nemlig fosfatidyletanolamin (PE) og fosfatidylkolin (PC), forbedrer RdRp-aktivering in vitro.Derimot viser fosfatidylglyserol (PG) en sterk og dominerende hemmende effekt på in vitro RdRp-aktivering.Vi demonstrerer også at PE og PC stimulerer RdRp-viral plus-streng RNA [(+)RNA] interaksjon, mens PG hemmer bindingen av det virale RNA til RdRp.Basert på de stimulerende kontra hemmende rollene til ulike fosfolipider i tombusvirus RdRp-aktivering, foreslår vi at lipidsammensetningen til målrettede subcellulære membraner kan brukes av tombusvirus til å regulere ny VRC-sammenstilling i løpet av infeksjonen. Den viruskodede RNA-avhengige RNA-polymerase (RdRp), som er ansvarlig for å syntetisere det virale RNA-avkommet i infiserte celler av flere positiv-tråd RNA-virus, er i utgangspunktet inaktiv.Denne strategien vil sannsynligvis unngå viral RNA-syntese i cytosolen som raskt vil føre til induksjon av RNA-utløste cellulære antivirale responser.Under sammenstillingen av det membranbundne replikasekomplekset blir det virale RdRp aktivert gjennom en ufullstendig forstått prosess som gjør RdRp i stand til RNA-syntese.Ved å bruke TBSV RdRp viser vi at den co-opterte cellulære Hsp70-chaperonen og nøytrale fosfolipider letter RdRp-aktivering in vitro.I motsetning til dette har fosfatidylglyserol (PG) en dominerende hemmende effekt på in vitro RdRp-aktivering og RdRp-viral RNA-interaksjon, noe som antyder at det membranøse mikrodomenet som omgir RdRp i stor grad påvirker dets evne til RNA-syntese.Dermed avhenger aktiveringen av det virale RdRp sannsynligvis av flere vertskomponenter i infiserte celler.