Produkter

Mekanistisk innsikt i en Ca2+-avhengig familie av alfa-mannosidaser i en menneskelig tarmsymbiont.

Tykktarmsbakterier, eksemplifisert ved Bacteroides thetaiotaomicron, spiller en nøkkelrolle i å opprettholde menneskers helse ved å utnytte store familier av glykosidhydrolaser (GHs) for å utnytte kostholdspolysakkarider og vertsglykaner som næringsstoffer.Slik utvidelse av GH-familien er eksemplifisert ved de 23 GH92-glykosidasene som er kodet av B. thetaiotaomicron-genomet.Her viser vi at dette er alfa-mannosidaser som virker via en enkelt forskyvningsmekanisme for å utnytte verts N-glykaner.Den tredimensjonale strukturen til to GH92 mannosidaser definerer en familie av to-domene proteiner der det katalytiske senteret er lokalisert ved domenegrensesnittet, og gir syre (glutamat) og base (aspartat) assistanse til hydrolyse i en Ca(2+)- avhengig måte.De tredimensjonale strukturene til GH92-ene i kompleks med inhibitorer gir innsikt i spesifisiteten, mekanismen og konformasjonsveien til katalyse.Ca(2+) spiller en viktig katalytisk rolle i å hjelpe til med å forvrenge mannosiden bort fra dens grunntilstand (4)C(1) stolkonformasjon mot overgangstilstanden. (Bibliografi: Nat.Chem.Biol.6, 125-32, (2010）

Frontal affinitetskromatografi av ovalbuminglykoasparaginer på en concanavalin A-sepharose-kolonne.En kvantitativ studie av bindingsspesifisiteten til lektinet.

Interaksjonene mellom Sepharose 4B-immobilisert concanavalin A (ConA) med 10 glykoasparaginer avledet fra ovalbumin ble undersøkt kvantitativt ved frontal affinitetskromatografi.I denne metoden påføres en karbohydratløsning kontinuerlig på en ConA-Sepharose-kolonne og retardasjonen av elueringsfronten måles som en parameter for styrken til interaksjonen.Dissosiasjonskonstanten (Kd) for hvert sakkarid med ConA kan bestemmes.En analyse av bindingen av p-nitrofenyl-alfa,D-mannosid har vist at bindingsegenskapene til ConA ikke endres vesentlig etter immobilisering på Sepharose 4B.Hver av ovalbumin-glykosparaginene ble merket med tritium ved den reduktive metyleringsmetoden for analyse.En sammenligning av de oppnådde Kd-verdiene viste at bindingen av ConA varierer betydelig med svært små strukturelle forskjeller i glykosylkjeden.Resultatene tyder på at ConA gjenkjenner en spesifikk glykosylkjedestruktur, Man alfa 1-6(Man alfa 1-3)Man, hvor minst én hydroksylgruppe i C-3-posisjonen til C-6-koblet mannose bør være fri.