Produkter

X-gal (også forkortet BCIG for 5-brom-4-klor-3-indolyl-β-D-galaktopyranosid) er en organisk forbindelse som består av galaktose knyttet til en substituert indol.Forbindelsen ble syntetisert av Jerome Horwitz og medarbeidere i 1964. Det formelle kjemiske navnet er ofte forkortet til mindre nøyaktige, men også mindre tungvinte setninger som bromklorindoksylgalaktosid.X fra indoksyl kan være kilden til X i X-gal-sammentrekningen.X-gal brukes ofte i molekylærbiologi for å teste for tilstedeværelsen av et enzym, β-galaktosidase, i stedet for det vanlige målet, et β-galaktosid.Det brukes også til å oppdage aktiviteten til dette enzymet i histokjemi og bakteriologi.X-gal er en av mange indoksylglykosider og estere som gir uløselige blå forbindelser som ligner på indigo fargestoff som et resultat av enzymkatalysert hydrolyse.

X-gal er en analog av laktose, og kan derfor hydrolyseres av β-galaktosidase-enzymet som spalter β-glykosidbindingen i D-laktose.X-gal, når den spaltes av β-galaktosidase, gir galaktose og 5-brom-4-klor-3-hydroksyindol - 1. Sistnevnte dimeriserer deretter spontant og oksideres til 5,5'-dibrom-4,4'-diklor -indigo - 2, et intenst blått produkt som er uløselig.X-gal i seg selv er fargeløs, så tilstedeværelsen av blåfarget produkt kan derfor brukes som en test for tilstedeværelse av aktiv β-galaktosidase.Dette gjør det også mulig å bruke bakteriell β-galaktosidase (såkalt lacZ ) som reporter i forskjellige applikasjoner.

I to-hybridanalyse kan β-galaktosidase brukes som reporter for å identifisere proteiner som interagerer med hverandre.I denne metoden kan genombiblioteker screenes for proteininteraksjon ved bruk av gjær eller bakteriesystem.Der det er en vellykket interaksjon mellom proteiner som screenes, vil det føre til binding av et aktiveringsdomene til en promoter.Hvis promoteren er koblet til et lacZ-gen, vil produksjonen av β-galaktosidase, som resulterer i dannelsen av blåpigmenterte kolonier i nærvær av X-gal, derfor indikere en vellykket interaksjon mellom proteiner.Denne teknikken kan være begrenset til screening av biblioteker med størrelse mindre enn rundt 106. Den vellykkede spaltningen av X-gal skaper også en merkbart stygg lukt på grunn av fordampning av indol.

Siden X-gal selv er fargeløs, kan tilstedeværelsen av blåfarget produkt brukes som en test for tilstedeværelsen av en aktiv β-galaktosidase.

Denne enkle identifiseringen av et aktivt enzym gjør at genet for βgalaktosidase (lacZ-genet) kan brukes som et reportergen i forskjellige applikasjoner.