Produkter

Monogalaktopyranosider av fluorescein og fluoresceinmetylester: syntese, enzymatisk hydrolyse ved biotnylert β-galaktosidase og bestemmelse av translasjonsdiffusjonskoeffisient

Fluoresceinmonoglykosider (d-galaktopyranosid (FMG) og d-glukopyranosid) og deres metylester (MFMG) er blitt fremstilt fra acetobromogglukose/galaktose og fluoresceinmetylester i gode utbytter.Enzymatiske hydrolyseeksperimenter (ved bruk av biotinylert β-galaktosidase) av galaktoderivatene er utført og kinetiske parametere ble beregnet.En 15–20 ganger økning av fluorescensintensiteten er observert under hydrolysen.En lineær økning av fluorescens har blitt observert på kort tid og lav konsentrasjon av substrat, noe som gjør disse forbindelsene nyttige og følsomme prober for galaktosidaser.Størrelsen på Michaelis-Menten-konstanten (Km)-verdien for MFMG er høyere enn for FMG, noe som antyder en mulig konformasjonsendring av det fluorogene substratet.Km-verdien for biotinylert β-Gal med FMG er lavere enn for det native enzymet.Denne observasjonen indikerer høyere substrataffinitet til det biotinylerte enzymet sammenlignet med det native enzymet.Translasjonsdiffusjonskoeffisienter er målt for både fluorogene substrater og begge produktene, ved bruk av fluorescenskorrelasjonsspektroskopi.Translasjonsdiffusjonskoeffisienter for fluorogene substrater og de enzymatiske hydrolyseproduktene har blitt målt til å være like, i området 3,5–4,5 × 10–10 m2 s−1.En forbedring eller retardasjon av den enzymatiske kinetikken på grunn av forskjell i translasjonsmobilitet av substrat og produkt er således ikke så tydelig.